LOS OBJETIVOS DEL CURSO SON:
El objetivo de este curso teórico es presentar la diversidad de técnicas disponibles para el diagnóstico genético de enfermedades humanas, desde las técnicas de citogenética hasta las técnicas de diagnóstico molecular mediante secuenciación de ADN y ARN, incluyendo la secuenciación de nueva generación (Next Generation Sequencing).
Programa
CONCEPTOS GENERALES DE GENÉTICA
1.1 Estructura de los ácidos nucleicos
Gen, cromosoma, replicación, exón, intrón, ADN, RNA, ,..
1.2 Genoma humano y mecanismos de expresión génica
Cromosomas, mitosis, meiosis, transcripción traducción, RNA mensajero,
EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
2.1 Obtención de ADN y ARN a partir de muestras biológicas
Lisis, purificación, precipitación ADN, RNA, cuantificación, pureza, absorbancia
2.2 Sistemas automatizados para la extracción de ácidos nucleicos
Lisis, purificación, precipitación ADN, RNA, cuantificación, resina, partícula magneticas
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
3.1 Fundamentos de la PCR
Hibridación, desnaturalización, elongación, Taq polimerasa, dNTPs, cebadores, magnesio, Tm, ciclos, ADN molde, amplificación, termociclador
3.2 PCR a tiempo real
Hibridación, desnaturalización, elongación, Taq polimerasa, fluorescencia, cebadores, sondas TaqMan, sondas FRET, sondas Molecular Beacon, SybrGreen, curva de melting
3.3 Cuantificación mediante PCR a tiempo real Cuantificación absoluta, cuantificación relativa, estándares, pendiente, R2, Ct
3.4 Genotipado mediante PCR a tiempo real SNP, sondas TaqMan, sondas FRET, curva de melting, HRM
3.5 Aplicaciones específicas de la PCR
MLPA, microsatélites, PCR digital, TP-PCR, mutaciones dinámicas
3.6 Plataformas de alto rendimiento
SNP, genotipado,PCR a tiempo real, pirosecuenciación, olor rofotometría de masas, fluorescencia
SECUENCIACIÓN DE ÁCIDOS NÚCLEICOS
4.1 Bases moleculares de la secuenciación de ADN Sanger
Sanger, polimerasa, cebador, dNTPs, ddNTPs, termociclador, electroforesis capilar
4.2 Aplicación de la secuenciación en el diagnóstico genético
Diagnóstico, enfermedad genética, mutación, polimorfismo, homocigoto, heterocigoto, deleción, inserción, exón, splicing
4.3 NGS: Bases moleculares de la Pirosecuenciación ADN, pirosecuenciación, Roche, PCR en emulsión, luminiscencia, luciferasa, adaptadores, bead
4.4 Resecuenciación mediante NGS
Preparación de librerías, amplificación, purificación, adaptadores, secuenciación, profundidad, cobertura, SNPs,
4.5 NGS: Bases moleculares de la secuenciación en puente
ADN, clusters, adaptadores, flowcell, Illumina, terminadores reversibles, pass-filter, densidad, index, fluoróforos, laser, NGS.
4.6 RNA-Seq
Preparación de librerías, transcriptoma, expresión diferencial, isoformas, SNPs,
NGS: Bases moleculares de la secuenciación mediante hibridación ADN, hibridación, sondas, PCR en emulsión, olor-space, adaptadores, SOLID, ligasa, NGS.
4.8 Secuenciación de exomas
Preparación de librerías, captura, exoma, genoma, cobertura
4.9 Analisis Bioinformatico I
Calidad de secuencias, duplicados de PCR, Q30, Q20,
4.10 Analisis Bioinformatico II
Alineamiento, FastQ, BAM, SAM, VCF, variantes,
TÉCNICAS CITOGENÉTICAS Y OTRAS APLICACIONES
5.1 Técnicas de Citogenética
Citogenética, cariotipo, cromosoma, bandeado, alteraciones estructurales, aneuploidías, translocaciones, inversiones, deleciones, FISH
5.2 Técnicas de moleculares de diagnóstico genómico Genómica, MLPA, CGH, microarrays, Next Generation Sequencing
5.3 Array de expresíon y genotipado
Hibridación, ADN, RNA, isoformas, SNPs, CNVs, GWAS, perdida de heterocigosidad
5.4 Técnicas en diagnóstico prenatal
Estima de riesgos, indicaciones, técnicas invasivas, prenatal no invasivo, técnicas de diagnóstico prenatal, limitaciones
5.5 Técnicas en diagnóstico preimplatacional DGP, tecnologías, célula única, biopsia embrionaria
5.6 Técnicas en análisis epigénetico
Regulación epigenética, modificación de histonas, metilación del ADN, expresión de miRNAs, pirosecuenciación, ChiP
PRÁCTICAS DE LABORATORIO
Información Adicional
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